產(chǎn)品名稱：人組織蛋白酶抗體（Cath Ab）ELISA Kit 
英文名稱：Human Cathepsin Antibodies,Cath Ab ELISA Kit
產(chǎn)品分類：人自身免疫類ELISA試劑盒[Human autoimmunity ELISA Kit]
產(chǎn)品編號(hào)：E0306h
檢驗(yàn)方法：ELISA
包 裝：96T

本試劑僅供研究使用

試驗(yàn)原理：
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知AGEs濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測蠢棱。先將和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后甩栈，加入親和素標(biāo)記過的HRP泻仙。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物量没，然后加入底物A玉转、B，和酶結(jié)合物同時(shí)作用殴蹄。產(chǎn)生顏色究抓。顏色的深淺和樣品中濃度呈比例關(guān)系。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：800ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說明書進(jìn)行稀稀
空白對(duì)照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標(biāo)記的抗AGEs抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說明書進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾水兄哮。
2． 加樣器：5ul肚微、10ul、50ul参匀、100ul旭眼、200、500ul昭仓、1000ul料害。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A凯辆、B掸栋。一旦接觸到這些液體，請(qǐng)盡快用水沖洗宜裂。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝浑季、抽煙或使用化妝品。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份掀哎。

操作注意事項(xiàng)
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存俩莽，使用前恢復(fù)到室溫旺坠。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存豹绪。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中价淌，密封保存，以免變質(zhì)瞒津。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好蝉衣。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用巷蚪。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染病毡，吸取終止液和底物A、B液時(shí)屁柏，避免使用帶金屬部分的加樣器啦膜。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品淌喻。
6． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干僧家，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)宜柱，避免長時(shí)間打開蓋子侦演。底物B對(duì)光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下拣薄。避免用手接觸左撤，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值校搀。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*三二，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9． 按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間房幌、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作会刀。

樣品收集、處理及保存方法
1堡迷、 血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激变跃。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后骇幽，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2脸候、 血漿-----EDTA穷娱、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測运沦。1000×g離心30分鐘去除顆粒泵额。
3配深、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4嫁盲、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎篓叶。1000×g離心10分鐘，取上清液
5羞秤、 保存------如果樣品不立即使用缸托，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍瘾蛋。盡可能的不要使用溶血或高血脂血俐镐。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾哺哼。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍佩抹。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋應(yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備虽柜，不能儲(chǔ)存飒晴。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 ng/ml （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul财偶。
400 ng/ml （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 ng/ml （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 ng/ml （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 ng/ml （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 ng/ml （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 ng/ml （空白對(duì)照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul拙位。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

操作步驟
1． 使用前窥书，將所有試劑充分混勻碴厂。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡偷被，產(chǎn)生加樣上的誤差刮盗。
2． 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔逝遣。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定书县，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)耽盛。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔叉屠、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體忿檩。蓋上膜板尉尾，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時(shí)燥透。
4． 甩去孔內(nèi)液體沙咏，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒班套，甩去洗滌液肢藐，用吸水紙拍干故河。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌吆豹，洗滌次數(shù)增加一次鱼的。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻痘煤，37℃溫育30分鐘凑阶。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液速勇，振蕩30秒晌砾，甩去洗滌液，用吸水紙拍干欠慢。重復(fù)此操作3次衫荒。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次笋夸。
7． 每孔加入底物A液啃、B各50ul，輕輕振蕩混勻椿啦，37℃溫育10分鐘墨仰。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板估董，迅速加入50ul終止液拯耿，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9． 在450nm波長處測定各孔的OD值胃愉。

建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的射粹，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品现粗。稀釋度的線性雅镊。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)刃滓。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)仁烹、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1咧虎、儀器值：于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2卓缰、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y），相應(yīng)的AGEs標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）砰诵，做得相應(yīng)的曲線僚饭，樣品的AGEs含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度。

3胧砰、檢測值范圍：0-800ng/ml

4鳍鸵、敏感度： 1.0 ng/ml