預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測(cè)定人血清住拭、血漿潭袱、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它相關(guān)液體中腫瘤特異生長(zhǎng)因子（TSGF）含量柱嫌。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中TSGF水平。用純化的抗體包被微孔板屯换，制成固相抗體编丘，往包被單抗的微孔中依次加入TSGF、生物素化的抗人TSGF抗體彤悔、HRP標(biāo)記的親和素嘉抓，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色晕窑，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色抑片。顏色的深淺和樣品中的TSGF呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）杨赤，計(jì)算樣品濃度议乐。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml翔实，蓋好后靜置10分鐘以上谒绍，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為10000 pg/ml颓腮，做系列倍比稀釋后底悍，分別稀釋成10000 pg/ml，5000 pg/ml 谭某，2500 pg/ml蜡瓜，1250 pg/ml，625 pg/ml接竣，312 pg/ml昨浆，156 pg/ml，其原液直接作為zui高標(biāo)準(zhǔn)濃度巢季，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 pg/ml魔呈，臨用前15分鐘內(nèi)配制。
如配制5000 pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml 10000 pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中沾谓，混勻即可委造，其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液：1×20ml/瓶。
4. 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml/瓶昏兆。
5. 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml/瓶枫虏。
6. 檢測(cè)溶液A：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1：100稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100ul）爬虱，實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml隶债。如1ul檢測(cè)溶液A加99ul檢測(cè)稀釋液A的比例配制，輕輕混勻跑筝，在使用前一小時(shí)內(nèi)配制死讹。
7. 檢測(cè)溶液B：1×120ul/瓶（1：100）臨用前以檢測(cè)稀釋液B1：100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A曲梗。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶赞警。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍稀并。
10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）仅颇。
標(biāo)本的采集及保存
1．細(xì)胞培養(yǎng)物上清：請(qǐng)離心后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20℃梗力，且應(yīng)避免反復(fù)凍融瘦肥。
2．血清：標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)筷品，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存挟伯，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3．血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑絮眨，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘拇支，或?qū)?biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融低白。
注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果唬爹，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。
操作步驟
各試劑在使用前平衡至室溫酣夫。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔押赋、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔若又。除空白孔外仙冕，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測(cè)樣品100ul，注意不要有氣泡秩彤，輕輕混勻叔扼，酶標(biāo)板加上蓋，37℃反應(yīng)120分鐘漫雷。
2. 棄去液體瓜富，甩干鳍咱，不用洗滌。
3. 每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100ul食呻，37℃,60分鐘流炕。洗板3次澎现，350ul/每孔仅胞，甩干。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液 100ul剑辫，37℃干旧，60分鐘，洗板5次妹蔽，甩干椎眯。
5. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色30分鐘（此時(shí)肉眼可見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色绎疟，后3-4孔梯度不明顯）咒舰。
6. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)（此時(shí)蘭色立轉(zhuǎn)黃色）曼砾。用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）埂帜。
注：
1． 每次實(shí)驗(yàn)留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑跑著，只是zui后加底物溶液及2NH2SO4跑科。測(cè)量時(shí)先用此孔調(diào)OD值至零。
2．為防止樣品蒸發(fā)门幌，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)贝渣。
洗板方法
手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙熏盲，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次确告；將推薦的洗滌緩沖液至少0.4ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘券雕，根據(jù)需要遇患，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)虽另，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中暂刘。
特異性
    本試劑盒可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人TSGF，且與其它相關(guān)蛋白無(wú)交叉反應(yīng)捂刺。
計(jì)算
  以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)（對(duì)數(shù)坐標(biāo)）谣拣，OD值為縱坐標(biāo)（普通坐標(biāo)），在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線族展，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度森缠；再乘以稀釋倍數(shù)拔鹰；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式贵涵，計(jì)算出樣品濃度列肢，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度宾茂。
注意事項(xiàng)
1． 洗滌過(guò)程非常重要瓷马，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。
2． 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)跨晴，如標(biāo)本數(shù)量多裂怕，推薦使用排槍加樣。
3． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線曹是，做復(fù)孔椒缀。
4． 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定房睁，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以稀釋倍數(shù)脑播。
5．在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液工作液時(shí)侈吨，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制冗级，不能混淆。
6．底物請(qǐng)避光保存是临。
檢測(cè)范圍：
156 pg/ml -10000 pg/ml
說(shuō)明
1．試劑盒保存：-20℃（較長(zhǎng)時(shí)間不用時(shí)）粮森；2-8℃（頻繁使用時(shí)）。
2．有效期：6個(gè)月
3．濃洗滌液會(huì)有鹽析出兆又，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶拢宛。
4．剛開(kāi)啟的酶聯(lián)板孔中可能會(huì)含有少許水樣物質(zhì)，此為正吵旅В現(xiàn)象渤昌，不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響。
5．中走搁、英文說(shuō)明書可能會(huì)有不*之處独柑，請(qǐng)以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。