本試劑僅供研究使用

試驗(yàn)原理：
試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知AGEs濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)息聪。先將和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育眉崩。洗滌后，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP员研。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌徙蜓，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A阶质、B贫怀，和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色糕伐。顏色的深淺和樣品中濃度呈比例關(guān)系砰琢。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：800ng/ml 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀
空白對(duì)照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標(biāo)記的抗AGEs抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

自備材料
1． 蒸餾水。
2． 加樣器：5ul良瞧、10ul陪汽、50ul、100ul褥蚯、200挚冤、500ul、1000ul赞庶。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等训挡。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B歧强。一旦接觸到這些液體澜薄，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品表悬。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份蓄帐。

操作注意事項(xiàng)
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫俏川。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存射疤。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中符殊，密封保存，以免變質(zhì)倾桩。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好倘秸。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用眼骗。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染轨皮，吸取終止液和底物A、B液時(shí)方秤，避免使用帶金屬部分的加樣器燎厘。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品益锻。
6． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干蠢琳，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)镜豹，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子傲须。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下趟脂。避免用手接觸泰讽，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值昔期。
8． 加入試劑的順序應(yīng)*已卸，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
9． 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間镇眷、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作咬最。

樣品收集、處理及保存方法
1欠动、 血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激永乌。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后具伍，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離翅雏。
2、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽咒娶、肝素血漿可用于檢測(cè)仍枕。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3吗罪、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物尚蔗。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎话贯。1000×g離心10分鐘篡搓，取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用露使，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存页镜，避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血答肤。如果血清中大量顆粒纸牌，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍愧杯。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍涎才。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備，不能儲(chǔ)存民效。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻憔维。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
800 ng/ml （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul。
400 ng/ml （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
200 ng/ml （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
100 ng/ml （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
50 ng/ml （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
25 ng/ml （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 ng/ml （空白對(duì)照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul畏邢。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋业扒。

操作步驟
1． 使用前，將所有試劑充分混勻舒萎。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫程储，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差臂寝。
2． 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)章鲤。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定咆贬，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔败徊。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔呆逼、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)侣豌。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板嘲陋，輕輕振蕩混勻幼浩，37℃溫育1小時(shí)盘荸。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液软健，振蕩30秒售检，甩去洗滌液，用吸水紙拍干祸榨。重復(fù)此操作3次彤擒。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次火晕。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP来锥，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘液珠。
6． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液辅甥，振蕩30秒酝润，甩去洗滌液，用吸水紙拍干璃弄。重復(fù)此操作3次要销。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次夏块。
7． 每孔加入底物A疏咐、B各50ul，輕輕振蕩混勻脐供，37℃溫育10分鐘浑塞。避免光照。
8． 取出酶標(biāo)板政己，迅速加入50ul終止液酌壕，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果。
9． 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值歇由。

建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）
A 800 800 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 400 400 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 200 200 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 100 100 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 50 50 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 25 25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的卵牍，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到精確的結(jié)果。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品桌懊。稀釋度的線性陋锚。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)英嬉。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)是菇、板間變異系數(shù)均小于10%。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1雄工、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2枕络、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）硬拴，相應(yīng)的AGEs標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X），做得相應(yīng)的曲線搜澈，樣品的AGEs含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度魁济。

3、檢測(cè)值范圍：0-800ng/ml

4乏傀、敏感度： 1.0 ng/ml