時(shí)至今日，代謝組學(xué)已經(jīng)成為生物組學(xué)研究領(lǐng)域的重要組成部分溶褪。通過(guò)檢測(cè)生物樣本中小分子代謝物币旧，使得我們對(duì)于各種生物體的代謝系統(tǒng)以及代謝組與基因組、轉(zhuǎn)錄組和蛋白質(zhì)組在生命的分子過(guò)程中的相互作用有了深入的理解猿妈。
高分辨質(zhì)譜(HRMS)技術(shù)結(jié)合生物信息學(xué)和統(tǒng)計(jì)分析是當(dāng)前表征生物樣本中小分子代謝物的主要手段之一吹菱。然而，由于生物體內(nèi)代謝物的結(jié)構(gòu)復(fù)雜于游、多樣毁葱，實(shí)現(xiàn)生物樣本中小分子代謝物的全覆蓋鑒定和準(zhǔn)確定量分析仍然是本領(lǐng)域的主要挑戰(zhàn)垫言。其中贰剥，大極性倾剿、離子代謝物的檢測(cè)尤其受到關(guān)注。離子色譜主要使用離子交換的分離原理蚌成，和常規(guī)液相色譜主要基于疏水吸附的反相分離原理形成互補(bǔ)前痘，可以很好分離常規(guī)液相色譜難以分離的強(qiáng)極性可電離代謝物。即使是基于親水相互作用的HILIC色譜可以分離強(qiáng)極性代謝物秕刊，但也難以分離強(qiáng)電離代謝物崎爽。離子型物質(zhì)分離，必須使用離子型物質(zhì)做為流動(dòng)相腮德，但離子型物質(zhì)本身與質(zhì)譜的最佳檢測(cè)環(huán)境并不兼容摹撰。因此，我們需要安裝膜抑制器作為一個(gè)持續(xù)工作的脫鹽裝置枫技，通過(guò)膜轉(zhuǎn)移的原理去除對(duì)位離子行翘，使酸堿變成純水，從而實(shí)現(xiàn)與質(zhì)譜兼容秧朝。
圖1 不同極性化合物需要不同的色譜分離系統(tǒng)進(jìn)行分析
分離度
核苷酸领末、糖類等在代謝通路中存在多個(gè)同分異構(gòu)體，這些同分異構(gòu)體在細(xì)胞代謝中承擔(dān)著不同且重要的功能噩振。因此痘涧，我們不僅需要檢出相關(guān)化合物，更需要將這些同分異構(gòu)體代謝物進(jìn)行有效色譜分離钻寿。圖2展示了IC與HILIC分析21種極性代謝物對(duì)照品的分離效果纤壁。大部分化合物在HILIC色譜柱上出峰情況良好，然而捺信，對(duì)于磷酸糖類以及順式酌媒、反式丁烯二酸等同分異構(gòu)體代謝物來(lái)說(shuō)，HILIC的分離效果明顯差于IC残黑。在細(xì)胞樣本的測(cè)試中馍佑，不同色譜條件下對(duì)m/z 259.0224進(jìn)行提取離子流(圖3)。IC色譜條件下檢測(cè)到了11個(gè)色譜峰梨水，檢出數(shù)量和強(qiáng)度顯著高于其他色譜條件拭荤。根據(jù)精確質(zhì)荷比信息，推測(cè)該系列化合物的元素組成為C6H13O9P疫诽，在代謝物數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索舅世，有至少33個(gè)代謝物符合該元素組成，其中包括葡萄糖奇徒、果糖雏亚、半乳糖缨硝、甘露糖等多種重要的磷酸單糖。
圖2 21種代謝物對(duì)照品使用IC和HILIC進(jìn)行分離的峰形比較
圖 3 細(xì)胞樣本中磷酸單糖化合物在不同色譜條件下的色譜分離比較
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靈敏度
在濃度為60 ppb(0.2-0.7 μmol/L)的情況下罢低，使用IC-MS分析極性代謝物對(duì)照品谎拴。(圖2)這些代謝物的信噪比(S/N)約為1000，相當(dāng)于柱上量0.5-2.5 pmol和月。其中一半的代謝物可在非常低的濃度下(60 ppt呐品，相當(dāng)于柱上樣量3.4 fmol以下)被檢測(cè)到，信噪比在3到20之間逸铆。最低檢測(cè)限(LODs)的濃度范圍為0.04-0.5 nmol/L(見(jiàn)表1)垒汉，展示了超高靈敏度。
表1 21種代謝物在cap IC-Orbitrap平臺(tái)的最低檢測(cè)限（LODs）
重現(xiàn)性
在連續(xù)6天的日間穩(wěn)定性考察中苦钱，每天平行測(cè)試6針對(duì)照品混標(biāo)(600 ppb)盛闻，所有化合物的保留時(shí)間和響應(yīng)強(qiáng)度RSD均小于8%，完全適應(yīng)代謝組學(xué)分析要求避晾。(圖4)在實(shí)際細(xì)胞樣本測(cè)試中悼晨，6種細(xì)胞中的11種磷酸單糖以及穩(wěn)定同位素內(nèi)標(biāo)馬尿酸-d5的色譜保留時(shí)間和響應(yīng)強(qiáng)度同樣表現(xiàn)出良好的重現(xiàn)性(n=3)。
圖4 日間重現(xiàn)性考察(n=6)
圖5 不同細(xì)胞樣本中11種磷酸單糖的離子流圖
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代謝通路覆蓋度
采用IC-MS的方法進(jìn)行細(xì)胞代謝組學(xué)分析灸室，幾乎完整地覆蓋了糖酵解途徑和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要代謝物乘硬。(圖6)通過(guò)相關(guān)測(cè)試結(jié)果，可以幫助我們有效觀察細(xì)胞能量代謝鹿鳖、代謝穩(wěn)態(tài)的變化扁眯。
圖6 糖酵解、TCA代謝途徑及細(xì)胞樣本中相關(guān)代謝物含量測(cè)試結(jié)果(點(diǎn)擊查看大圖)
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小結(jié)
離子抑制技術(shù)的發(fā)展翅帜，特別是連續(xù)電解離子抑制技術(shù)姻檀，使得離子交換色譜與高分辨質(zhì)譜的結(jié)合成為可能，這種組合帶來(lái)了新的分析機(jī)會(huì)涝滴。IC-MS平臺(tái)技術(shù)的商業(yè)化推廣使得越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室探索了IC-MS的新應(yīng)用領(lǐng)域绣版，并揭示了超出傳統(tǒng)應(yīng)用領(lǐng)域的成功案例。例如歼疮，除了對(duì)無(wú)機(jī)離子的分析外杂抽，有機(jī)和生物極性和離子分析物已經(jīng)成功地在廣泛的環(huán)境和生物樣品類型中進(jìn)行了有針對(duì)性的分析和表征。使用離子抑制的IC-MS分析具有產(chǎn)生洗脫劑和極性選擇性的組合特性韩脏，減少了有效基質(zhì)復(fù)雜性缩麸，降低了質(zhì)譜檢測(cè)中可能導(dǎo)致分析干擾的基質(zhì)效應(yīng)和色譜擁擠。分析物通常已經(jīng)處于離子形式赡矢；因此杭朱，通過(guò)質(zhì)譜檢測(cè)實(shí)現(xiàn)高靈敏度分析可以最大程度地減少離子抑制。相比之下洁拓，用于離子和高極性分析物表征的其他色譜方法(如RP-MS窑笑、HILIC-MS秕射、GC-MS和IP-MS)可能抑制分析物的離子特性(使用低質(zhì)子溶劑、衍生化等)综界，以便提供有效的分析條件瞎角，這可能導(dǎo)致覆蓋范圍和信號(hào)抑制的偏差√丈叮總之晃逞，IC-MS已經(jīng)成為一種有效的互補(bǔ)(或替代)分析工具箍颗，表現(xiàn)出高水平的平臺(tái)穩(wěn)定性眉剿、保留時(shí)間重現(xiàn)性、靈敏度和低檢測(cè)限纲愁。迄今為止团何，大多數(shù)應(yīng)用集中在法醫(yī)科學(xué)、環(huán)境科學(xué)诫汇、技術(shù)和制造業(yè)以及食品化學(xué)領(lǐng)域司型。然而，在制藥科學(xué)爽篷、臨床化學(xué)悴晰、診斷學(xué)、微生物學(xué)逐工、代謝組學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)等領(lǐng)域的應(yīng)用越來(lái)越多铡溪，這些領(lǐng)域還有許多重要的進(jìn)一步發(fā)展和應(yīng)用的空間(圖5)。無(wú)論是在復(fù)雜基質(zhì)中還是在高極性或離子分析物中泪喊，IC-MS都有新的應(yīng)用空間棕硫。展望未來(lái)，我們認(rèn)為IC-MS的未來(lái)應(yīng)用將包括對(duì)復(fù)雜生物和環(huán)境系統(tǒng)和過(guò)程的深入研究袒啼，宿主-病原體關(guān)系哈扮，微生物組代謝，植物與土壤化學(xué)之間的關(guān)系蚓再，藥代動(dòng)力學(xué)和藥效動(dòng)力學(xué)滑肉，以及與疾病的診斷、預(yù)后和病因相關(guān)的生物標(biāo)志物研究摘仅。從傳統(tǒng)意義上講靶庙，這些領(lǐng)域在分析上具有特殊的挑戰(zhàn)性，特別是在使用非靶向方法時(shí)锉寿；因此轻樟，IC-MS在發(fā)現(xiàn)導(dǎo)向和有針對(duì)性應(yīng)用中有潛力發(fā)揮重要作用。
參考文獻(xiàn)：
[1] Wang J, Christison TT, Misuno K, et al. Metabolomic profiling of anionic metabolites in head and neck cancer cells by capillary ion chromatography with Orbitrap mass spectrometry. Anal Chem. 2014;86(10):5116-5124. doi:10.1021/ac500951v
[2] Hu S, Wang J, Ji EH, Christison T, Lopez L, Huang Y. Targeted Metabolomic Analysis of Head and Neck Cancer Cells Using High Performance Ion Chromatography Coupled with a Q Exactive HF Mass Spectrometer. Anal Chem. 2015;87(12):6371-6379. doi:10.1021/acs.analchem.5b01350
[3] Ngere JB, Ebrahimi KH, Williams R, Pires E, Walsby-Tickle J, McCullagh JSO. Ion-Exchange Chromatography Coupled to Mass Spectrometry in Life Science, Environmental, and Medical Research. Anal Chem. 2023;95(1):152-166. doi:10.1021/acs.analchem.2c04298
[4] McCullagh J, Probert F. New analytical methods focusing on polar metabolite analysis in mass spectrometry and NMR-based metabolomics. Curr Opin Chem Biol. 2024;80:102466. doi:10.1016/j.cbpa.2024.102466
[5] Skaripa-Koukelli I, Hauton D, Walsby-Tickle J, et al. 3-Bromopyruvate-mediated MCT1-dependent metabolic perturbation sensitizes triple negative breast cancer cells to ionizing radiation. Cancer Metab. 2021;9(1):37. Published 2021 Oct 14. doi:10.1186/s40170-021-00273-6
[6] Haythorne E, Lloyd M, Walsby-Tickle J, et al. Altered glycolysis triggers impaired mitochondrial metabolism and mTORC1 activation in diabetic β-cells. Nat Commun. 2022;13(1):6754. Published 2022 Nov 14. doi:10.1038/s41467-022-34095-x
[7] Sun Y, Saito K, Iiji R, Saito Y. Application of Ion Chromatography Coupled with Mass Spectrometry for Human Serum and Urine Metabolomics. SLAS Discov. 2019;24(7):778-786. doi:10.1177/2472555219850082
[8] Hirayama A, Tabata S, Kudo R, et al. The use of a double coaxial electrospray ionization sprayer improves the peak resolutions of anionic metabolites in capillary ion chromatography-mass spectrometry. J Chromatogr A. 2020;1619:460914. doi:10.1016/j.chroma.2020.460914
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