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人葡萄糖氧化酶(GOD)elisa試劑盒使用說明書

Elisa kit規(guī)格：48孔配置/96孔配置

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液：1.5ml×1瓶

酶標(biāo)試劑：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）

【人葡萄糖氧化酶(GOD) elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用 

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)恕沫，OD值為縱坐標(biāo)监憎，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度婶溯；再乘以稀釋倍數(shù)鲸阔；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式爬虱，計(jì)算出樣品濃度隶债，再乘以稀釋倍數(shù)腾它，即為樣品的實(shí)際濃度跑筝。

試劑盒組成：

封板膜:2片（48）/2片（96）

說明書:1份

密封袋:1個(gè)

標(biāo)準(zhǔn)品：   2700ng/L 0.5ml×1瓶 0.5ml×1瓶  2-8℃保存

酶標(biāo)包被板:  1×48     1×96         2-8℃保存

樣品稀釋液: 3ml×1瓶  6 ml×1瓶     2-8℃保存

顯色劑A液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存

顯色劑B液: 3ml×1瓶 6 ml×1瓶     2-8℃保存

終止液:     3ml×1瓶 6ml×1瓶     2-8℃保存

濃縮洗滌液:（20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30倍）×1瓶   2-8℃保存

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人葡萄糖氧化酶(GOD) 水平。用純化的人葡萄糖氧化酶(GOD) 抗體包被微孔板瞒滴，制成固相抗體曲梗，往包被單抗的微孔中依次加入類葡萄糖氧化酶(GOD) ，再與HRP標(biāo)記的類葡萄糖氧化酶(GOD) 抗體結(jié)合妓忍，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物虏两，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色世剖，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色充贿。顏色的深淺和樣品中的類葡萄糖氧化酶(GOD) 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）菲贝，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人葡萄糖氧化酶(GOD) 濃度差炮。

目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中類葡萄糖氧化酶(GOD) 的含量威跟。

服務(wù)承諾： 

供貨期：款到發(fā)貨戴砍。
工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢和指導(dǎo) 。請(qǐng)
為客戶提供來樣檢測(cè)服務(wù)往茄，zui大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性(免費(fèi)代測(cè))枯邓。

保存條件及有效期：

試劑盒保存：2-8℃| 有效期：6個(gè)月 

【人葡萄糖氧化酶(GOD) elisa試劑盒】樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）乘占。仔細(xì)收集上清掰媚，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑习棋，混合10-20分鐘后仙冕，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清秩彤，保存過程中如有沉淀形成叔扼，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集漫雷，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）瓜富。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成降盹，應(yīng)再次離心与柑。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行蓄坏。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)价捧，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）涡戳。仔細(xì)收集上清结蟋。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液渔彰，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右嵌屎。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份胯挚。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）滴督。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成咨桶，應(yīng)再次離心瘫碾。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量椎敞。加入一定量的PBS奴爷，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆妹呕稀?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度贝渣。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分熏盲。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）确告。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)券雕，其余冷凍備用遇患。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)啡邑。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)贱勃，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品谤逼，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性贵扰。

操作步驟

• 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣：在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔，在*流部、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl戚绕，然后在*、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl枝冀，混勻舞丛；然后從*孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔果漾，再在第三球切、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl，混勻绒障；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉晃烟，再各取50μl分別加到第五、第六孔中曹是，再在第五椒缀、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul，混勻房睁；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七常迹、第八孔中侈吨，再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl奖卒，混勻后從第七均膛、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中淘巩，再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl服英，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl遇穷，濃度分別為1800ng/L探橱，1200ng/L ，600ng/L绘证，300ng/L隧膏， 150ng/L）。
• 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）胞枕、待測(cè)樣品孔杆煞。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）腐泻。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部决乎，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻派桩。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘瑞驱。
• 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
• 洗滌：小心揭掉封板膜窄坦，棄去液體唤反，甩干，每孔加滿洗滌液鸭津，靜置30秒后棄去旧搔，如此重復(fù)5次，拍干沫跨。
• 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl仿扩，空白孔除外。
• 溫育：操作同3祖销。
• 洗滌：操作同5种鳖。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl夕荆，輕輕震蕩混勻哈滥，37℃避光顯色15分鐘. 
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）添毒。
• 測(cè)定：以空白空調(diào)零喷总，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行植西。

【人葡萄糖氧化酶(GOD) elisa試劑盒】注意事項(xiàng)：

• 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用柳卒，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存宫屠。
• 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出列疗，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果浪蹂。
• 各步加樣均應(yīng)使用加樣器抵栈，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差乌逐。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)竭讳，如標(biāo)本數(shù)量多创葡，推薦使用排槍加樣。
• 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線绢慢，做復(fù)孔灿渴。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定胰舆，計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）骚露。
• 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染缚窿。
• 底物請(qǐng)避光保存棘幸。
• 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
• 所有樣品妨舟，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理问乌。
• 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異邦叶，以英文說明書為準(zhǔn)寂齐。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%

檢測(cè)范圍：

0.2IU/L - 6IU/L 

 

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